Den spættede natugle lever primært i tætte, gamle skove, hvor den er afhængig af store træer med hulheder til redepladser. Den er nataktiv og opholder sig skjult i vegetationen om dagen.
Uglen jager om natten ved hjælp af sit fremragende høresans og gode nattesyn. Den fanger byttet ved lydløst at glide ned fra en siddeplads og gribe det med sine kraftige kløer. Kosten består hovedsageligt af små pattedyr, men kan variere afhængigt af fødetilgængelighed.
Spættede natugler lever ofte i faste par og forsvarer deres territorier. Yngletiden foregår typisk i foråret, hvor hunnen lægger æg i naturlige hulheder eller forladte reder. Begge forældre deltager i pasningen af ungerne.
Arten er sårbar over for tab af levesteder, især på grund af skovrydning. Bevarelse af gamle skovområder er derfor afgørende for den spættede natugles overlevelse.
